В воде, с которой контактирует человек, могут содержаться не только химические элементы, соли и примеси, но и патогенные микроорганизмы. Определить их наличие может бактериологический анализ воды, проведенный в лаборатории. Что такое БАК анализ? Какие параметры образца оценивает? О чем они говорят? Чтобы определить присутствие в конкретном образце жидкости бактерий и микроорганизмов, применяют бактериологический анализ воды — исследование, позволяющее определить и концентрацию выявленных микробов и организмов. Относится тест к типу микробиологических аналитических исследований. Он позволяет с высокой точностью указать, насколько пригодна/непригодна к употреблению вода, из которой был взят образец. Данное исследование наиболее часто применяют для оценивания колодезных и скважинных продуктов, реже для анализа водопроводной (хозяйственно-бытовой) воды. Наша независимая лаборатория проводит бактериологический анализ воды в Москве, используя самые современные методики выявления патогенной микрофлоры образца. Мы предлагаем доступные цены на все типы исследований и гарантируем их достоверные результаты.

Как проводится бактериологический анализ воды?

Определение бактерий и патогенных микроорганизмов в пробе осуществляется посредством оптических, биохимических и прочих методов исследования:


  • Титрационного, или метода множества пробирок. Используются индикаторы среды, изменяющие окрас образца при соприкосновении с кислотами и продуктами жизнедеятельности микроорганизмов. Применяется для оценки качества колодезной, скважиной воды, а также образцов из бассейна, природных поверхностных источников.
  • Метод АТФ. Используется специальный реактив — аденозинтрифосфорная кислота, с помощью которой можно выявить концентрацию биологических объектов в пробе. Измерение концентрации осуществляется прибором люминометром, поскольку микробы при воздействии АТФ продуцируют свет. Тест обязательно применяют для оценки качества технических и сточных вод, реже питьевой воды.

Бактериологический анализ воды. Образец анализа на бактериальные эндотоксины

  • Посев и подсчет. Используются чашки Петри, в которых выращиваются колонии бактерий в питательной среде (агар). Этот анализ воды на бактерии хорош тем, что позволяет невооруженным взглядом оценить наличие/отсутствие в пробе микроорганизмов. В течение суток при поддержании определенной температуры их колонии (если в пробе присутствуют бактерии) разрастаются до чрезвычайных размеров. Чтобы результаты были достоверными, образец жидкости разбавляется. Используется для оценки качества любых классов питьевой воды.

  • Мембранная фильтрация. Усовершенствованный чашечный метод подсчета. Образцы подвергаются вакуумной фильтрации. В нашей лаборатории применяются специальные мембранные фильтры, задерживающие микроорганизмы, которые в последствие выращиваются в питательной среде и рассматриваются специалистами под микроскопом. Метод позволяет определить вид и класс бактерий. Используется при оценке питьевых вод из любых источников.
  • Выращивание в жидкой среде. Наиболее достоверным будет бактериальный анализ воды, который проводится посредством смешивания пробы с питательным, но жидким агаром. Смесь образца и среды разливается в специальную тару и запечатывается. В такой среде колонии размножаются активнее и быстрее.

Бактериологический анализ воды. Образец анализа на бактериальные эндотоксины


Все методы исследования пробы показывают число жизнеспособных микроорганизмов в предъявленном образце. Но поскольку он представляет собой маленькую пробу, взятую из большого объема, то результаты всех тестов являются статистическими. После того, как будет завершен БАК анализ воды, наши специалисты выдадут клиентам результаты. В них будет указано общий объем микроорганизмов и бактерий, рассчитанный в 1 мл среды. Единица измерения общего числа колоний — КОЕ/мл.

Когда следует проводить БАК анализ воды: нормы и допущения

При необходимости осуществлять контроль качества. Бактериальное исследование проводится совершенно для всех типов жидкостей, с которыми контактирует человек, — не только для питьевой воды. Здоровье человека зависит от того, насколько незаразна вода в бассейне, реке, пруду, скважине или колодце. Помимо патогенных микроорганизмов и бактерий в пробе могут присутствовать эндотоксины — особый вид липополисахаридов, которые способны вызывать серьезные заболевания. Отсутствие бактерий важно и для сточных вод, которые после очистки в системе очистных сооружений, выпускают в грунт.

В результатах оценки будут отражены следующие факты:

  • Микробное число (общий показатель, измеряется при T=200С и T=370С) — не должно быть выше 50 КОЕ/мл.
  • Колиформные бактерии (общий показатель) — присутствие в пробе не допускается (исследуется на каждые 100 мл).
  • Колиформные термотолерантные (общий показатель) — наличие в образце не допускается (оценка на каждые 100 мл).

При получении результатов важно обратить внимание на приведенные выше нормы, а также на образец анализа воды на бактериальные эндотоксины — их в норме не должно быть больше 0,125 ЭЕ/мл. Если в представленной пробе жидкости обнаружены колибактерии, то это говорит о ее загрязнении сточными водами. Такой продукт нельзя употреблять, с ним не рекомендуется контактировать, поскольку патогенны могут проникать и через повреждения на поверхности кожи.

Бактериологический анализ воды. Образец анализа на бактериальные эндотоксины

В нашей аккредитованной лаборатории можно заказать химический и бактериологический анализ воды, по результатам которых можно говорить о качестве и пригодности образца. Применяются исследования при покупке, ремонте и установке систем очистки (фильтрации) воды. Специфика БАК теста заключается в том, чтобы правильно взять пробы воды, которые действительны лишь в течение 1-2 часов после забора. Поэтому мы рекомендуем купить специальную тару для забора пробы или пригласить специалиста. Наша лаборатория предоставляет полный спектр услуг.

Источник: oskada.ru


Отбор воды для Химического анализа

Тара

Для химического анализа необходимо заполнить водой чистую пластиковую тару (оптимально 1,5 л). Использовать бутылки из-под сладких, газированных или ароматизированных напитков, а также солёной или минеральной воды недопустимо.
Если выбранный Вами анализ включает определение содержания нефтепродуктов, необходимо заполнить дополнительную стеклянную тару объемом 0,2 л.
Если выбранный Вами анализ включает определение содержания сероводорода, необходимо заполнить дополнительную стеклянную тару объемом 0,5 л (необходимо использовать консервант).

Отбор проб

При отборе воды из проточного источника, непосредственно перед отбором необходимо пролить воду сильной струёй в течение 3-5 минут. Перед отбором проб ёмкости и крышки необходимо 3 раза промыть изнутри водой, подлежащей анализу. Использование моющих средств недопустимо. Наполнять тару необходимо тонкой струёй по стенке сосуда «под горлышко». Это снижает насыщение воды кислородом и предотвращает протекание реакций.

Отбор воды для Микробиологического анализа

Тара

Для микробиологического анализа необходимо использовать стерильный контейнер для биоматериалов объемом 150-200 мл.

Отбор проб

Перед взятием пробы необходимо протереть водопроводный кран спиртовой салфеткой, уделив особое внимание месту выхода воды.
При отборе воды из водопровода, скважины или колонки необходимо пролить воду сильной струёй в течение 3–5 минут.
При отборе воды из колодца с помощью ведра необходимо обдать ведро кипятком для дезинфекции.


Отбор пробы через поливочные шланги и предметы, контактирующие с почвой, не допускается.
Для отбора пробы необходимо надеть перчатки и вскрыть упаковку стерильного контейнера. Не касаясь внутренней поверхности ёмкости, отобрать образец воды (2/3 объема контейнера) и закрыть крышкой.

Доставка и хранение пробы

Рекомендуем доставлять пробу сразу после отбора.
Если сразу после отбора нет возможности доставить пробу в лабораторию, допускается хранение образцов при температуре 2–10 °C в течение 1 суток.

Источник: ion-lab.ru

12. САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОДЫ

Цель работы: изучение методов оценки санитарнобактериологического состояния питьевой воды и воды из естественных водоемов.

Вода, используемая на предприятиях пищевой промышленности, должна отвечать требованиям, предъявляемым к питьевой воде действующими нормативными документами. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определяют по общему числу микроорганизмов и количеству бактерий группы кишечных палочек в ее определенном объеме.


Качество воды централизованных систем питьевого водоснабжения определяют в соответствии с санитарными правилами и нормами. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безопасна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства (табл. 12.1).

Таблица 12.1. Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении (по микробиологическим и паразитологическим показателям) СанПиН 2.1.4.1074-01


Показатели

Единица

Норматив

Общее микробное число (ОМЧ)

Число КОЕ в 1 см3

Не более 50

Термотолерантные колиформные бактерии

Число бактерий в 100 см3

Отсутствуют

Общие колиформные бактерии

Число бактерий в 100 см3

Отсутствуют

Колифаги

Число БОЕ* в 100 см3

Отсутствуют

Споры сульфитредуцирующих бактерий

Число спор в 20 см3

Отсутствуют

Цисты лямблий

Число цист в 50 дм3

Отсутствуют

* БОЕ — бляшкообразующие единицы.

12.1. Отбор проб и подготовка их к анализу

Воду для санитарно-бактериологического контроля отбирают в количестве 500 см3 в бутылки, предварительно простерилизованные в бумажных пакетах, с ватно-марлевой пробкой, покрытой сверху бумажным колпачком.

Перед отбором пробы кран или край трубы обжигают зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открывают кран и в течение 10-15 мин воду спускают, затем производят отбор пробы. Вода подлежит анализу не позже чем через 2 ч после отбора.

Пробы воды из открытых водоемов — колодцев, бассейнов, рек, озер — отбирают с помощью батометров, представляющих собой металлический каркас с массивным свинцовым дном — грузилом. В металлический каркас вставлена бутылка. Батометр погружают на заданную глубину и открывают бутылку, потягивая за веревку, привязанную к пробке. После наполнения бутылки батометр извлекают и закрывают ее стерильной пробкой.


Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором, так как под действием хлора микробы в воде погибают. В качестве дехлоратора используют серноватистый натрий из расчета 10 мг на 500 см исследуемой воды.

К отобранным пробам воды прилагают сопроводительный документ с указанием соответствующих данных. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре от 4 до 10 °С.

12.2. Определение общего микробного числа воды

Общее микробное число (ОМЧ) — это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см3.

В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см3. При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. Разведения готовят так, как указано в разделе 8.3.

Из исследуемого образца и из пробирок с его разведениями в соответствии со степенью предполагаемого микробного загрязнения отбирают по 1 см3, вносят в стерильные чашки Петри и заливают 10-12 см расплавленного и остуженного до температуры 45 °С мясопептонного агара. Круговыми движениями руки, вращая чашки по горизонтальной поверхности стола, распределяют их содержимое равномерным слоем по всей площади дна. После застывания агара чашки с посевами помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С. После инкубации подсчитывают число выросших колоний.


Определение микробного числа указанным методом позволяет выявить лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы.

12.3. Определение содержания колиформных бактерий в воде

С эпидемиологической точки зрения особенно важным является обнаружение в воде патогенных микроорганизмов — возбудителей кишечных инфекций (брюшного тифа, дизентерии, холеры и др.) Однако в связи с большой трудностью обнаружения патогенных микроорганизмов при бактериологических анализах ограничиваются определением так называемых санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ). К санитарно-показательным относят микроорганизмы, постоянно находящиеся в естественных полостях человека или животных. Присутствие СПМ в различных объектах внешней среды является индикатором их загрязнения человеком. Чем больше СПМ во внешней среде, тем более вероятным становится присутствие специфических возбудителей инфекционных заболеваний.

В качестве СПМ наибольшее значение имеют бактерии группы кишечных палочек (БГКП). К группе кишечных палочек относят колиформные бактерии родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.

При определении количества СПМ в воде используют следующие характеристики:

• коли-титр — наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для питьевой воды, прошедшей очистку, титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см3;

• коли-индекс — количество кишечных палочек в 1 дм3 воды. Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3.

Колиформные бактерии определяют в воде методом мембранных фильтров или бродильным методом.

Бродильный метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации

посевов при температуре 37 °С в средах накопления с последующим высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм3 воды.

При исследовании воды централизованного водоснабжения исследуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см3. Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десятикратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см3 и 1 см3 без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды, дающим право закончить исследование через 24 ч;

б) при образовании кислоты и газа производится высев материала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает основание на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования;

в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микроскопирование препарата из колоний и постановка оксидазного теста.

Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonodaceae и других водных сапрофитов, которые, в отличие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу.

Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают петлей по 2-3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным реактивом (30 г α-д-нафтола растворяют в 2,5 см3 этанола, прибавляют 7,5 см3 дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением).

При отрицательном результате оксидазного теста бумага при контакте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным.

Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немедленно дать ответ о наличии в воде БГКП.

При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных колоний ведут подсчет и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 3-4 ч. При образовании кислоты (изменение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразования — отрицательным.

После проведения анализа записывают в лабораторный журнал окончательные результаты (положительные и отрицательные) по каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.

Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде Эндо при температуре 37 °С, дифференцированием выросших колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см3 воды.

Подготовка мембранных фильтров. Для фильтрования воды отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до температуры 80 °С дистиллированную воду и ставят на небольшой огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры оставляют в воде до употребления.

Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном, смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него подкладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтровальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают и закрепляют верхнюю часть прибора — воронку (рис. 12.1).

Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом мембранных фильтров

Бактериологический анализ воды

Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов. В воронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в водопроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см3. По окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чашки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные соответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить исследования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;

б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;

в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфологически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположительных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе заканчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли- индекса в пересчете на 1 дм3 воды;

г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцветных колоний подсчитывают их число и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После инкубации в течение 3-4 ч при температуре 37 °С отмечают изменение цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке. В этом случае результат считается положительным. Если изменений в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.

Пример определения колииндекса: профильтровано три объема воды по 100 см3. На первом и втором фильтрах выросло по три колонии, на третьем — девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний. Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен: (1000 х 15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим образом: 1000:50 = 20.

Контрольные вопросы

1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопасности питьевой воды?

2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?

3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?

4. Какими методами определяют колиформные бактерии?

5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?

6. С какой целью проводят тест на оксидазу?

Источник: lifelib.info


Categories: Другое

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте, как обрабатываются ваши данные комментариев.